Спасибо за посещение сайта nature.com. В используемой вами версии браузера поддержка CSS ограничена. Для наилучшего результата мы рекомендуем использовать последнюю версию браузера (или отключить режим совместимости в Internet Explorer). Кроме того, для обеспечения дальнейшей поддержки, на этом сайте не будут использоваться стили и JavaScript.
Меламин является известным пищевым загрязнителем, который может присутствовать в некоторых категориях продуктов питания как случайно, так и преднамеренно. Целью данного исследования было подтверждение возможности обнаружения и количественного определения меламина в детских смесях и сухом молоке. Было проанализировано в общей сложности 40 образцов коммерчески доступных продуктов питания, включая детские смеси и сухое молоко, из разных регионов Ирана. Приблизительное содержание меламина в образцах определялось с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием (ВЭЖХ-УФ). Была построена калибровочная кривая (R2 = 0,9925) для определения меламина в диапазоне 0,1–1,2 мкг/мл. Пределы количественного определения и обнаружения составили 1 мкг/мл и 3 мкг/мл соответственно. Содержание меламина в детских молочных смесях и сухом молоке было проверено, и результаты показали, что уровни меламина в образцах детских молочных смесей и сухого молока составляли 0,001–0,095 мг кг−1 и 0,001–0,004 мг кг−1 соответственно. Эти значения соответствуют законодательству ЕС и Кодексу Алиментариус. Важно отметить, что потребление этих молочных продуктов с пониженным содержанием меламина не представляет значительного риска для здоровья потребителей. Это также подтверждается результатами оценки риска.
Меламин — это органическое соединение с молекулярной формулой C3H6N6, производное цианамида. Он обладает очень низкой растворимостью в воде и примерно на 66% состоит из азота. Меламин — широко используемое промышленное соединение с широким спектром законных применений в производстве пластмасс, удобрений и оборудования для пищевой промышленности (включая пищевую упаковку и кухонную утварь)1,2. Меламин также используется в качестве носителя лекарственных средств для лечения заболеваний. Высокое содержание азота в меламине может привести к неправильному использованию соединения и приданию пищевым ингредиентам свойств белковых молекул3,4. Поэтому добавление меламина в пищевые продукты, в том числе молочные, увеличивает содержание азота. Таким образом, был ошибочно сделан вывод о том, что содержание белка в молоке выше, чем оно есть на самом деле.
На каждый грамм добавленного меламина содержание белка в пище увеличивается на 0,4%. Однако меламин хорошо растворяется в воде и может нанести более серьезный вред. Добавление 1,3 грамма меламина в жидкие продукты, такие как молоко, может увеличить содержание белка в молоке на 30%5,6. Хотя меламин добавляют в продукты животного и даже человеческого происхождения для повышения содержания белка7, Комиссия Codex Alimentarius (CAC) и национальные органы власти не одобрили меламин в качестве пищевой добавки и отнесли его к опасным веществам при проглатывании, вдыхании или попадании на кожу. В 2012 году Международное агентство по исследованию рака Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) отнесло меламин к канцерогенам класса 2B, поскольку он может быть вреден для здоровья человека8. Длительное воздействие меламина может вызвать рак или повреждение почек2. Меламин в пищевых продуктах может образовывать комплексы с циануровой кислотой, формируя нерастворимые в воде желтые кристаллы, которые могут повреждать ткани почек и мочевого пузыря, а также вызывать рак мочевыводящих путей и потерю веса9,10. Он может вызывать острое пищевое отравление и, в высоких концентрациях, смерть, особенно у младенцев и маленьких детей.11 Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) также установила допустимую суточную дозу (ДСД) меламина для человека на уровне 0,2 мг/кг массы тела в день на основе рекомендаций CAC.12 Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) установило максимальный остаточный уровень меламина на уровне 1 мг/кг в детских смесях и 2,5 мг/кг в других продуктах питания.2,7 В сентябре 2008 года сообщалось, что несколько отечественных производителей детских смесей добавляли меламин в сухое молоко для увеличения содержания белка в своей продукции, что привело к отравлению сухим молоком и вызвало общенациональную волну отравлений меламином, в результате которой заболели более 294 000 детей и были госпитализированы более 50 000. 13
Грудное вскармливание не всегда возможно из-за различных факторов, таких как трудности городской жизни, болезни матери или ребенка, что приводит к использованию детских молочных смесей для кормления младенцев. В результате были созданы заводы по производству детских молочных смесей, максимально приближенных по составу к грудному молоку14. Детские молочные смеси, продаваемые на рынке, обычно изготавливаются из коровьего молока и, как правило, содержат специальную смесь жиров, белков, углеводов, витаминов, минералов и других соединений. Чтобы быть максимально приближенными к грудному молоку, содержание белков и жиров в смеси варьируется, и в зависимости от типа молока, они обогащаются такими соединениями, как витамины и минералы, например, железо15. Поскольку младенцы являются чувствительной группой, и существует риск отравления, безопасность потребления сухого молока имеет жизненно важное значение для здоровья. После случая отравления меламином среди китайских младенцев страны по всему миру стали уделять этому вопросу пристальное внимание, и чувствительность этой области также возросла. Поэтому особенно важно усилить контроль за производством детских молочных смесей для защиты здоровья младенцев. Существуют различные методы обнаружения меламина в пищевых продуктах, включая высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), электрофорез, сенсорный метод, спектрофотометрию и иммуноферментный анализ с использованием антител к антигенам16. В 2007 году Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) разработало и опубликовало метод ВЭЖХ для определения меламина и циануровой кислоты в пищевых продуктах, который является наиболее эффективным методом определения содержания меламина17.
Концентрация меламина в детских молочных смесях, измеренная с помощью новой методики инфракрасной спектроскопии, варьировалась от 0,33 до 0,96 миллиграммов на килограмм (мг кг-1). 18 Исследование, проведенное в Шри-Ланке, показало, что уровень меламина в сухом цельном молоке колеблется от 0,39 до 0,84 мг кг-1. Кроме того, в импортных образцах детских молочных смесей были обнаружены самые высокие уровни меламина — 0,96 и 0,94 мг/кг соответственно. Эти уровни ниже установленного законом предела (1 мг/кг), но для обеспечения безопасности потребителей необходима программа мониторинга. 19
В нескольких исследованиях изучалось содержание меламина в иранских детских смесях. Примерно 65% образцов содержали меламин, в среднем 0,73 мг/кг и максимум 3,63 мг/кг. В другом исследовании сообщалось, что уровень меламина в детских смесях варьировался от 0,35 до 3,40 мкг/кг, в среднем 1,38 мкг/кг. В целом, наличие и уровень меламина в иранских детских смесях оценивались в различных исследованиях, при этом в некоторых образцах содержание меламина превышало максимально допустимый предел, установленный регулирующими органами (2,5 мг/кг/корм).
Учитывая огромное прямое и косвенное потребление сухого молока в пищевой промышленности и особую важность детских молочных смесей для кормления детей, целью данного исследования было подтверждение эффективности метода обнаружения меламина в сухом молоке и детских молочных смесях. Первая задача исследования заключалась в разработке быстрого, простого и точного количественного метода обнаружения фальсификации меламином детских молочных смесей и сухого молока с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и ультрафиолетового (УФ) детектирования; вторая задача исследования состояла в определении содержания меламина в детских молочных смесях и сухом молоке, продаваемых на иранском рынке.
Приборы, используемые для анализа меламина, различаются в зависимости от места производства пищевых продуктов. Для измерения остатков меламина в молоке и детских смесях был использован чувствительный и надежный метод ВЭЖХ-УФ анализа. Молочные продукты содержат различные белки и жиры, которые могут мешать измерению меламина. Поэтому, как отмечают Сунь и др. 22, перед инструментальным анализом необходима соответствующая и эффективная стратегия очистки. В данном исследовании мы использовали одноразовые шприцевые фильтры. Для разделения меламина в детских смесях и сухом молоке мы использовали колонку C18. На рисунке 1 показана хроматограмма для обнаружения меламина. Кроме того, степень извлечения образцов, содержащих 0,1–1,2 мг/кг меламина, составляла от 95% до 109%, уравнение регрессии было y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), а значения относительного стандартного отклонения (RSD) варьировались от 0,8 до 2%. Имеющиеся данные указывают на надежность метода в исследованном диапазоне концентраций (таблица 1). Инструментальный предел обнаружения (LOD) и предел количественного определения (LOQ) меламина составили 1 мкг/мл и 3 мкг/мл соответственно. Кроме того, УФ-спектр меламина показал полосу поглощения при 242 нм. Метод обнаружения является чувствительным, надежным и точным. Этот метод может быть использован для рутинного определения уровня меламина.
Аналогичные результаты были опубликованы несколькими авторами. Для анализа меламина в молочных продуктах был разработан метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с фотодиодной матрицей (ВЭЖХ). Нижние пределы количественного определения составили 340 мкг кг−1 для сухого молока и 280 мкг кг−1 для детской смеси при 240 нм. Филацци и др. (2012) сообщили, что меламин не был обнаружен в детской смеси методом ВЭЖХ. Однако 8% образцов сухого молока содержали меламин на уровне 0,505–0,86 мг/кг. Титтлмиет и др.23 провели аналогичное исследование и определили содержание меламина в детской смеси (номер образца: 72) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией/масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) примерно в 0,0431–0,346 мг кг−1. В исследовании, проведенном Венкатасами и др. В работе (2010 г.) для определения содержания меламина в детских смесях и молоке использовался подход «зеленой химии» (без ацетонитрила) и обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Диапазон концентраций образцов составлял от 1,0 до 80 г/мл, а отклик был линейным (r > 0,999). Метод показал степень извлечения 97,2–101,2 в диапазоне концентраций 5–40 г/мл, а воспроизводимость составляла менее 1,0% относительного стандартного отклонения. Кроме того, наблюдаемые пределы обнаружения (LOD) и количественного определения (LOQ) составляли 0,1 г/мл и 0,2 г/мл/124 соответственно. Люттер и др. (2011 г.) определяли загрязнение меламином коровьего молока и детских смесей на молочной основе с помощью ВЭЖХ-УФ. Концентрации меламина варьировались от < 0,2 до 2,52 мг/кг. Линейный динамический диапазон метода ВЭЖХ-УФ составлял от 0,05 до 2,5 мг кг−1 для коровьего молока, от 0,13 до 6,25 мг кг−1 для детских смесей с массовой долей белка <15%, и от 0,25 до 12,5 мг кг−1 для детских смесей с массовой долей белка 15%. Пределы обнаружения (LOD и LOQ) составили 0,03 мг кг−1 (0,09 мг кг−1) для коровьего молока, 0,06 мг кг−1 (0,18 мг кг−1) для детских смесей с содержанием белка <15% и 0,12 мг кг−1 (0,36 мг кг−1) для детских смесей с содержанием белка 15%, при соотношении сигнал/шум 3 и 1025 для LOD и LOQ соответственно. (Diebes et al.) В исследовании (2012 г.) изучались уровни меламина в образцах детских молочных смесей и сухого молока с использованием ВЭЖХ/ДМД. В детских молочных смесях самый низкий и самый высокий уровни составили 9,49 мг кг−1 и 258 мг кг−1 соответственно. Предел обнаружения (LOD) составил 0,05 мг кг−1.
Джаваид и др. сообщили, что остаточное содержание меламина в детских смесях находится в диапазоне 0,002–2 мг кг−1, что было определено методом Фурье-преобразовательной инфракрасной спектроскопии (FT-MIR) (предел обнаружения = 1 мг кг−1; предел количественного определения = 3,5 мг кг−1). Резаи и др.27 предложили метод ВЭЖХ-ДДА (λ = 220 нм) для определения меламина и достигли предела количественного определения 0,08 мкг мл−1 для сухого молока, что ниже уровня, полученного в данном исследовании. Сунь и др. разработали метод ВЭЖХ-ДДА с обращенной фазой для обнаружения меламина в жидком молоке методом твердофазной экстракции (ТФЭ). Они получили предел обнаружения и предел количественного определения 18 и 60 мкг кг−128 соответственно, что более чувствительно, чем в данном исследовании. Монтесано и др. подтвердили эффективность метода ВЭЖХ-ДМД для оценки содержания меламина в белковых добавках с пределом количественного определения 0,05–3 мг/кг, который был менее чувствительным, чем метод, использованный в данном исследовании29.
Несомненно, аналитические лаборатории играют важную роль в защите окружающей среды, контролируя содержание загрязняющих веществ в различных образцах. Однако использование большого количества реагентов и растворителей во время анализа может привести к образованию опасных остатков. Поэтому в 2000 году была разработана «зеленая» аналитическая химия (ГАХ) для уменьшения или устранения негативного воздействия аналитических процедур на операторов и окружающую среду26. Для идентификации меламина использовались традиционные методы, включая хроматографию, электрофорез, капиллярный электрофорез и иммуноферментный анализ (ИФА). Однако среди многочисленных методов обнаружения электрохимические сенсоры привлекли большое внимание благодаря своей превосходной чувствительности, селективности, быстрому времени анализа и удобству использования30,31. «Зеленая» нанотехнология использует биологические пути для синтеза наноматериалов, что может уменьшить образование опасных отходов и потребление энергии, тем самым способствуя внедрению устойчивых практик. Например, нанокомпозиты, изготовленные из экологически чистых материалов, могут использоваться в биосенсорах для обнаружения таких веществ, как меламин32,33,34.
Исследование показывает, что твердофазная микроэкстракция (ТФМЭ) эффективно используется благодаря более высокой энергоэффективности и экологичности по сравнению с традиционными методами экстракции. Экологичность и энергоэффективность ТФМЭ делают ее отличной альтернативой традиционным методам экстракции в аналитической химии и обеспечивают более устойчивый и эффективный метод пробоподготовки35.
В 2013 году Ву и соавторы разработали высокочувствительный и селективный биосенсор на основе поверхностного плазмонного резонанса (мини-SPR), использующий связь между меламином и антителами к меламину для быстрого обнаружения меламина в детских смесях с помощью иммуноанализа. Биосенсор SPR в сочетании с иммуноанализом (с использованием конъюгированного с меламином бычьего сывороточного альбумина) представляет собой простую в использовании и недорогую технологию с пределом обнаружения всего 0,02 мкг/мл.
Насири и Аббасиан использовали высокопотенциальный портативный сенсор в сочетании с композитами оксида графена и хитозана (GOCS) для обнаружения меламина в коммерческих образцах37. Этот метод продемонстрировал сверхвысокую селективность, точность и скорость отклика. Сенсор GOCS показал замечательную чувствительность (239,1 мкМ−1), линейный диапазон от 0,01 до 200 мкМ, константу сродства 1,73 × 10⁴ и предел обнаружения до 10 нМ. Более того, в исследовании, проведенном Чандрасекаром и др. в 2024 году, был применен экологически чистый и экономически эффективный подход. Они использовали экстракт кожуры папайи в качестве восстанавливающего агента для синтеза наночастиц оксида цинка (ZnO-NPs) экологически чистым методом. Впоследствии была разработана уникальная методика микро-рамановской спектроскопии для определения меламина в детских смесях. Наночастицы ZnO, полученные из сельскохозяйственных отходов, продемонстрировали потенциал в качестве ценного диагностического инструмента и надежной, недорогой технологии для мониторинга и обнаружения меламина38.
Ализаде и др. (2024) использовали высокочувствительную флуоресцентную платформу на основе металлоорганического каркаса (МОК) для определения меламина в сухом молоке. Линейный диапазон и нижний предел обнаружения сенсора, определенные с помощью 3σ/S, составили 40–396,45 нМ (эквивалентно 25 мкг кг−1–0,25 мг кг−1) и 40 нМ (эквивалентно 25 мкг кг−1) соответственно. Этот диапазон значительно ниже максимально допустимых уровней остаточного содержания (МДЛС), установленных для идентификации меламина в детских смесях (1 мг кг−1) и других образцах пищевых продуктов/кормов (2,5 мг кг−1). Флуоресцентный сенсор (тербий (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) продемонстрировал более высокую точность и более прецизионную измерительную способность, чем HPLC39, при обнаружении меламина в сухом молоке. Биосенсоры и нанокомпозиты, созданные в рамках концепции «зеленой химии», не только повышают возможности обнаружения, но и минимизируют экологические риски в соответствии с принципами устойчивого развития.
Принципы «зеленой химии» были применены к различным методам определения меламина. Один из подходов — разработка экологически чистого метода дисперсионной твердофазной микроэкстракции с использованием природного полярного полимера β-циклодекстрина, сшитого с лимонной кислотой, для эффективного извлечения меламина 40 из таких образцов, как детские смеси и горячая вода. Другой метод использует реакцию Манниха для определения меламина в образцах молока. Этот метод является недорогим, экологически чистым и высокоточным с линейным диапазоном 0,1–2,5 ppm и низким пределом обнаружения 41. Кроме того, был разработан экономически эффективный и экологически чистый метод количественного определения меламина в жидком молоке и детских смесях с использованием ИК-спектроскопии с преобразованием Фурье, обладающий высокой точностью и пределами обнаружения 1 ppm и 3,5 ppm соответственно 42. Эти методы демонстрируют применение принципов «зеленой химии» для разработки эффективных и устойчивых методов определения меламина.
В ряде исследований были предложены инновационные методы обнаружения меламина, такие как использование твердофазной экстракции и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)43, а также быстрой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), которая не требует сложной предварительной обработки или ионопарных реагентов, что снижает количество химических отходов44. Эти методы не только обеспечивают точные результаты определения меламина в молочных продуктах, но и соответствуют принципам «зеленой химии», минимизируя использование опасных химических веществ и снижая общее воздействие аналитического процесса на окружающую среду.
Было протестировано сорок образцов различных марок в трех повторениях, результаты представлены в таблице 2. Уровни меламина в образцах детской смеси и сухого молока варьировались от 0,001 до 0,004 мг/кг и от 0,001 до 0,095 мг/кг соответственно. Значимых различий между тремя возрастными группами детских смесей не наблюдалось. Кроме того, меламин был обнаружен в 80% образцов сухого молока, но 65% детских смесей были загрязнены меламином.
Содержание меламина в промышленном сухом молоке было выше, чем в детской молочной смеси, и разница была статистически значимой (p<0,05) (Рисунок 2).
Полученные результаты оказались ниже пределов, установленных FDA (ниже 1 и 2,5 мг/кг). Кроме того, результаты соответствуют пределам, установленным CAC (2010) и EU45,46, то есть максимально допустимый предел составляет 1 мг/кг для детских смесей и 2,5 мг/кг для молочных продуктов.
Согласно исследованию Ганати и др.47, проведенному в 2023 году, содержание меламина в различных видах упакованного молока в Иране варьировалось от 50,7 до 790 мкг кг−1. Их результаты были ниже допустимого предела, установленного FDA. Наши результаты ниже, чем результаты Шодера и др.48 и Римы и др.49. Шодер и др. (2010) обнаружили, что уровни меламина в сухом молоке (n=49), определенные методом ИФА, варьировались от 0,5 до 5,5 мг/кг. Рима и др. проанализировали остатки меламина в сухом молоке методом флуоресцентной спектрофотометрии и обнаружили, что содержание меламина в сухом молоке составляло 0,72–5,76 мг/кг. В 2011 году в Канаде было проведено исследование по мониторингу уровней меламина в детских смесях (n=94) с использованием жидкостной хроматографии (ЖХ/МС). Концентрация меламина оказалась ниже допустимого предела (предварительный стандарт: 0,5 мг кг−1). Маловероятно, что обнаруженные завышенные уровни меламина были тактикой, используемой для повышения содержания белка. Однако это нельзя объяснить использованием удобрений, перемещением содержимого контейнеров или подобными факторами. Кроме того, источник меламина в сухом молоке, импортируемом в Канаду, не был раскрыт50.
Хассани и др. измерили содержание меламина в сухом и жидком молоке на иранском рынке в 2013 году и получили аналогичные результаты. Результаты показали, что, за исключением одной марки сухого и жидкого молока, все остальные образцы были загрязнены меламином, с уровнями от 1,50 до 30,32 мкг г−1 в сухом молоке и от 0,11 до 1,48 мкг мл−1 в молоке. Примечательно, что циануровая кислота не была обнаружена ни в одном из образцов, что снижает вероятность отравления меламином для потребителей. 51 Предыдущие исследования оценивали концентрацию меламина в шоколадных изделиях, содержащих сухое молоко. Около 94% импортных образцов и 77% иранских образцов содержали меламин. Уровни меламина в импортных образцах варьировались от 0,032 до 2,692 мг/кг, тогда как в иранских образцах — от 0,013 до 2,600 мг/кг. В целом, меламин был обнаружен в 85% образцов, но только в одной конкретной марке его содержание превышало допустимый предел.44 Титтлмайер и др. сообщили об уровнях меламина в сухом молоке в диапазоне от 0,00528 до 0,0122 мг/кг.
В таблице 3 приведены результаты оценки риска для трех возрастных групп. Риск был меньше 1 во всех возрастных группах. Таким образом, меламин в детских смесях не представляет неканцерогенного риска для здоровья.
Низкий уровень загрязнения молочных продуктов может быть обусловлен непреднамеренным загрязнением в процессе приготовления, тогда как более высокий уровень может быть связан с преднамеренным добавлением. Кроме того, общий риск для здоровья человека от употребления молочных продуктов с низким содержанием меламина считается низким. Можно сделать вывод, что употребление продуктов, содержащих такое низкое количество меламина, не представляет никакой опасности для здоровья потребителей52.
Учитывая важность управления безопасностью пищевых продуктов в молочной промышленности, особенно в плане защиты здоровья населения, крайне важно разработать и валидировать метод оценки и сравнения уровней и остатков меламина в сухом молоке и детских смесях. Был разработан простой и точный метод ВЭЖХ-УФ спектрофотометрии для определения меламина в детских смесях и сухом молоке. Метод был валидирован для обеспечения его надежности и точности. Было показано, что пределы обнаружения и количественного определения метода достаточно чувствительны для измерения уровней меламина в детских смесях и сухом молоке. Согласно нашим данным, меламин был обнаружен в большинстве иранских образцов. Все обнаруженные уровни меламина были ниже максимально допустимых пределов, установленных CAC, что указывает на то, что потребление этих видов молочных продуктов не представляет риска для здоровья человека.
Все использованные химические реактивы были аналитической чистоты: меламин (2,4,6-триамино-1,3,5-триазин) 99% чистоты (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури); ацетонитрил для ВЭЖХ (Merck, Дармштадт, Германия); сверхчистая вода (Millipore, Морфхайм, Франция). Одноразовые шприцевые фильтры (Chromafil Xtra PVDF-45/25, размер пор 0,45 мкм, диаметр мембраны 25 мм) (Macherey-Nagel, Дюрен, Германия).
Для подготовки образцов использовались ультразвуковая ванна (Elma, Германия), центрифуга (Beckman Coulter, Крефельд, Германия) и ВЭЖХ (KNAUER, Германия).
Использовался высокоэффективный жидкостный хроматограф (KNAUER, Германия), оснащенный УФ-детектором. Условия анализа ВЭЖХ были следующими: использовалась система UHPLC Ultimate, оснащенная аналитической колонкой ODS-3 C18 (4,6 мм × 250 мм, размер частиц 5 мкм) (MZ, Германия). Элюентом ВЭЖХ (подвижной фазой) была смесь ТФУ/метанола (450:50 мл) со скоростью потока 1 мл/мин. Детектирование проводилось при длине волны 242 нм. Объем инъекции составлял 100 мкл, температура колонки — 20 °C. Поскольку время удерживания препарата велико (15 минут), следующую инъекцию следует проводить через 25 минут. Меламин идентифицировали путем сравнения времени удерживания и пика УФ-спектра стандартных образцов меламина.
Стандартный раствор меламина (10 мкг/мл) был приготовлен с использованием воды и хранился в холодильнике (4 °C) в защищенном от света месте. Исходный раствор разбавляли подвижной фазой и готовили рабочие стандартные растворы. Каждый стандартный раствор вводили в ВЭЖХ 7 раз. Калибровочное уравнение 10 рассчитывали методом регрессионного анализа определенной площади пика и определенной концентрации.
Коммерчески доступное сухое коровье молоко (20 образцов) и образцы различных марок детских смесей на основе коровьего молока (20 образцов) были приобретены в местных супермаркетах и ​​аптеках Ирана для кормления младенцев разных возрастных групп (0–6 месяцев, 6–12 месяцев и >12 месяцев) и хранились при температуре 4 °C до анализа. Затем 1 ± 0,01 г гомогенизированного сухого молока взвешивали и смешивали с ацетонитрилом:водой (50:50, об/об; 5 мл). Смесь перемешивали в течение 1 мин, затем подвергали ультразвуковой обработке в ультразвуковой ванне в течение 30 мин и, наконец, встряхивали в течение 1 мин. Затем смесь центрифугировали при 9000 × g в течение 10 мин при комнатной температуре, а надосадочную жидкость фильтровали в 2-мл флакон для автосамплера с помощью шприцевого фильтра 0,45 мкм. Затем фильтрат (250 мкл) смешивали с водой (750 мкл) и вводили в систему ВЭЖХ10,42.
Для проверки метода мы определили степень извлечения, точность, предел обнаружения (LOD), предел количественного определения (LOQ) и прецизионность в оптимальных условиях. LOD был определен как содержание образца с высотой пика, в три раза превышающей уровень фонового шума. С другой стороны, LOQ был определен как содержание образца с высотой пика, в 10 раз превышающей отношение сигнал/шум.
Реакция прибора определялась с помощью калибровочной кривой, состоящей из семи точек данных. Использовались различные содержания меламина (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 и 1,2). Была определена линейность процедуры расчета содержания меламина. Кроме того, в контрольные образцы добавляли несколько различных уровней меламина. Калибровочная кривая была построена путем непрерывного введения 0,1–1,2 мкг/мл стандартного раствора меламина в образцы детской смеси и сухого молока, и ее R² = 0,9925. Точность оценивалась по повторяемости и воспроизводимости процедуры и достигалась путем введения образцов в первый и три последующих дня (в трех повторениях). Повторяемость метода оценивалась путем расчета относительного стандартного отклонения (RSD%) для трех различных концентраций добавленного меламина. Для определения точности были проведены исследования по определению степени извлечения. Степень извлечения методом экстракции рассчитывалась при трех уровнях концентрации меламина (0,1, 1,2, 2) в образцах детской молочной смеси и сухого молока9,11,15.
Расчетная суточная доза потребления (РСНП) определялась по следующей формуле: РСНП = Ci × Cc/BW.
Где Ci — среднее содержание меламина, Cc — потребление молока, а BW — средний вес детей.
Анализ данных проводился с использованием программы SPSS 24. Нормальность распределения проверялась с помощью теста Колмогорова-Смирнова; все данные были получены с помощью непараметрических тестов (p = 0). Поэтому для определения значимых различий между группами использовались тест Крускала-Уоллиса и тест Манна-Уитни.
Ингельфингер-младший. Меламин и его влияние на глобальное загрязнение пищевых продуктов. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Линч, Р.А. и др. Влияние pH на миграцию меламина в детских мисках. Международный журнал загрязнения пищевых продуктов, 2, 1–8 (2015).
Барретт, М.П. и Гилберт, И.Х. Направленное воздействие токсичных соединений на внутреннюю часть трипаносом. Прогресс в паразитологии 63, 125–183 (2006).
Нирман, М.Ф. и др. Оценка меламиновых дендримеров в качестве носителей лекарственных средств in vitro и in vivo. Международный фармацевтический журнал, 281(1–2), 129–132(2004).
Всемирная организация здравоохранения. Экспертные совещания 1–4 по обзору токсикологических аспектов меламина и циануровой кислоты (2008).
Хау, А.К., Кван, Т.Х. и Ли, П.К.Т. Токсичность меламина и почки. Журнал Американского общества нефрологии 20(2), 245–250 (2009).
Озтюрк, С. и Демир, Н. Разработка нового адсорбента IMAC для идентификации меламина в молочных продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Журнал синтеза и анализа пищевых продуктов 100, 103931 (2021).
Чансуварн, В., Паник, С. и Имим, А. Простое спектрофотометрическое определение меламина в жидком молоке на основе реакции Манниха с зеленым красителем. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Деабес, М. и Эль-Хабиб, Р. Определение меламина в образцах детской смеси, сухого молока и пангасиуса методом ВЭЖХ/диодной хроматографии. Журнал экологической аналитической токсикологии, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Скиннер, К.Г., Томас, Дж.Д., и Остерло, Дж.Д. Токсичность меламина. Журнал медицинской токсикологии, 6, 50–55 (2010).
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ), Токсикологические и медицинские аспекты меламина и циануровой кислоты: Отчет о совместной экспертной встрече ВОЗ/ФАО, проведенной при поддержке Министерства здравоохранения Канады, Оттава, Канада, 1-4 декабря 2008 г. (2009).
Корма, С.А. и др. Сравнительное исследование липидного состава и качества порошка детской молочной смеси, содержащего новые функциональные структурные липиды, и коммерческой детской молочной смеси. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
Эль-Васиф, М. и Хашем, Х. Повышение питательной ценности, качественных характеристик и срока годности детских молочных смесей с использованием пальмового масла. Ближневосточный журнал сельскохозяйственных исследований 6, 274–281 (2017).
Инь, В. и др. Получение моноклональных антител против меламина и разработка непрямого конкурентного метода ИФА для обнаружения меламина в сыром молоке, сухом молоке и кормах для животных. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии 58(14), 8152–8157 (2010).